кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник отдела иммунологии и вирусологии ул. Садовая-Черногрязская, 14/19, Москва, 105062
PhD, leading researcher of immunology and virology department,
Sadovaya-Chernogriazskaya str., 14/19, Moscow, 105062
научный сотрудник отдела вирусных и аллергических заболеваний глаз,
ул. Садовая-Черногрязская, 14/19, Москва, 105062
researcher of infectious and allergic eye diseases department,
Sadovaya-Chernogriazskaya str., 14/19, Moscow, 105062
врач-бактериолог вирусологической микробиологической лаборатории,
ул. Садовая-Черногрязская, 14/19, Москва, 105062
bacteriologist of virological and bacteriological laboratory,
Sadovaya-Chernogriazskaya str., 14/19, Moscow, 105062
доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник отдела травматологии и реконструктивной хирургии,
ул. Садовая-Черногрязская, 14/19, Москва, 105062
MD, leading researcher of ocular trauma and reconstructive surgery department,
Sadovaya-Chernogriazskaya str., 14/19, Moscow, 105062
научный сотрудник отдела иммунологии и вирусологии,
ул. Садовая-Черногрязская, 14/19, Москва, 105062
researcher of immunology and virology department,
Sadovaya-Chernogriazskaya str., 14/19, Moscow, 105062
Кератомикозы вызываются разными грибами. Для верификации диагноза используют микробиологические анализы (микроскопия мазка, посев на культуральные среды). Недостатки микробиологических методов: существенное снижение чувствительности под влиянием предыдущего лечения, длительность получения ответа (посев учитывают на 3–7-й день).
Цель. Оценить эффективность полимеразной цепной реакции (ПЦР) в диагностике кератомикозов в сравнении с культуральным методом.
Пациенты и методы. Наблюдения выполнены у семи пациентов с тяжелой тотальной язвой роговицы длительностью более 3 недель. Биоматериал (соскобы с язвы роговицы и фрагменты роговиц, удаленных при сквозной кератопластике) исследовали в ПЦР реального времени и микробиологическими методами. В ПЦР использовали диагностический набор для дифференциального выявления ДНК Candida albicans и суммарной ДНК грибов (Fungi), позволяющий обнаруживать большинство патогенных грибов без определения их вида. Микробиологические методы включали микроскопию мазков, окрашенных по Грамму и 1 % раствором метиленовой сини, посев на питательные среды, в том числе на селективную среду для грибов (агар Сабуро с хлорамфениколом).
Результаты. ПЦР: во фрагментах всех удаленных при кератопластике роговиц (6 пациентов) выявлена общая для грибов ДНК (ДНК Fungi) и не обнаружена ДНК Сandida albicans, что коррелировало с результатами посева на среду Сабуро (плесневые грибы обнаружены в 5 из 6 роговиц). В соскобах с роговиц, взятых до операции, также выявлена ДНК Fungi; однако рост грибов при посеве на различные питательные среды не был обнаружен.
Заключение. Грибковые язвы роговицы — тяжелое заболевание, нередко приводящее к инвалидизации по зрению. Быстрое определение этиологии и правильный выбор терапии определяют исходы заболевания. Преимущество ПЦР по сравнению с культуральным методом: быстрота получения результатов (4 часа вместо 3–7 дней); высокая чувствительность, позволяющая выявлять грибы не только в ткани удаленной роговицы, но и в соскобах с язвы роговицы больных, ранее получавших противогрибковую терапию. Наличие коммерческих наборов для дифференциального выявления общей для грибов ДНК и ДНК Сandida albicans расширяет возможности ПЦР при скрининговой диагностике грибковых кератитов и выборе препаратов до определения вида возбудителя.
Fungi implicated in mycotic keratitis include different species. Conventional methods for the diagnosis of fungal keratitis include staining of corneal scarpings, culture medium (Sabouraud agar) for isolating fungi.
Purpose. To evaluate the effectiveness of polymerase chain reaction (PCR) for the detection of fungal etiology in comparison with the conventional diagnostic methods in cases with suspected fungal corneal ulcer.
Patients and methods. Seven patients with severe corneal ulcers with more than 3 weeks duration. Corneal scarpings and corneal buttons from seven patients who had undergone therapeutic keratoplasty were used for microbiological and PCR analysis. PCR diagnostic kits for the differential detection of Candida albicans DNA and total fungi DNA (DNA Fungi), which allows to identify most pathogenic fungi without determining their species were used. Microbiological methods: microscopy of gramstained smears, culture techniques, including selective for fungi agar Saburo with chloramphenicol.
Results. PCR: Fragments of all corneas removed from keratoplasty (6 patients) revealed fungal-common DNA (Fungi DNA) and did not detect Candida albicans DNA, which correlated with sowing results on Saburo medium (mold fungi found in 5 of 6 corneas). Fungi DNA was also detected in the corneal scraps taken prior to surgery; however, growth of fungi during sowing on various nutrient media was not found.
Conclusion. Corneal fungal ulcers are a serious disease, often leading to visual disability. The rapid determination of etiology and the correct choice of therapy determines the outcomes of the disease. The advantage of PCR over the culture method: the speed of obtaining results (4 hours instead of 3–7 days); high sensitivity, which allows detecting fungi not only in the tissue of the removed cornea, but also in scrapes from the cornea ulcer of patients who previously received antifungal therapy. The presence of commercial kits for differential detection of fungal-common DNA and DNA of Candida albicans extends the possibilities of PCR in the screening diagnosis of fungal keratitis and the selection of drugs before determining the type of pathogen.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.