Цель — разработать методику локального субретинального введения ксеногенных стволовых клеток меченых магнитными частицами, и экспериментально обосновать ее эффективность.
Материал и методы. В работе использована линия стволовых клеток НЕК-293 GFP меченых магнитными частицами. Исследование проведено на 84 глазах 42 кроликов породы шиншилла в возрасте 6 месяцев весом от 2,5 до 3,5 кг. Все правые глаза были опытными (42 глаза), левые (42 глаза) — контрольными. В опытной группе к склере подшивали комплекс полимерного эластичного магнитного имплантата (ПЭМИ) с лазерным зондом, проводили срединную витрэктомию и с помощью специально разработанного дозатора вводили HEK-293 GFP под сетчатку. В группе контроля ПЭМИ с лазерным зондом не фиксировали. В сроки 1, 3, 5, 7, 14 суток и 1 месяц проводили биомикроскопию, офтальмоскопию глазного дна с фотографированием, ультразвуковое офтальмосканирование, оптическую когерентную томографию (ОКТ), компьютерную томографию (КТ), морфологическое исследование (крио-гистологические срезы).
Результаты. По данным биомикроскопии в сроки наблюдения до 3 суток имела место инъекция сосудов в зоне операции. По данным офтальмоскопии, ультразвукового исследования в 1‑е сутки визуализировалась локальная отслойка сетчатки в зоне введения клеток, которая не наблюдалась в дальнейшие сроки наблюдениями. По данным КТ подтверждено место расположения ПЭМИ. По данным морфологического исследования доказано, что в опытной группе клетки располагаются в субретинальном пространстве в сроки до 14 суток, а в группе контроля — только до 3 суток.
Выводы. Разработанный хирургический способ дает возможность контролировать введение клеток в субретинальное пространство, снижает риск повреждения тканей и выхода клеток в полость стекловидного тела. Предложенная методика позволяет осуществить фиксацию клеточного материала в месте его локального введения и дает возможность прогнозирования движение клеток.
Purpose: is to develop a technique for local subretinal injection of xenogeneic stem cells labeled with magnetic particles and to prove experimentally its effectiveness.
Material and methods: We used a line of stem cells HEK-293 GFP,labeled with magnetic particles. The study was made on 84 eyes of 42 chinchilla rabbits 6 months of age, the weight were from 2.5 to 3.5 kg. All right eyes were experimental (42 eyes) and all left eyes (42 eyes) were the control group. In the experimental group we used original complex of polymer elastic magnetic implant (PEMI) with laser probe and fixed it to the sclera, then we made a median vitrectomy and injected HEK-293 GFP under the retina using a specially designed dispenser. In the control group PEMI was not fixed. We examined animals using biomicroscopy, ophthalmoscopy, ultrasound scanning, optical coherence tomography OCT), computer tomography (CT), morphological study (cryohistological sections) in 1, 3, 5, 7, 14 day and 1 month after surgery.
Results: According the results of biomicroscopy in observation periods up to 3 days the vascular injection was visualized in the area operation. According the results of ophthalmoscopy and ultrasound scanning in 1 day the local retinal detachment was visualized in the area of local injection of the stem cells, which was not visualized in terms of further observations. CT helped us to confirm the local place of PEMI fixation. The morphological study results showed that cells were located in the subretinal space up to 14 days in the experimental group, and only up 3 days in the control group.
Conclusion: The suggested surgical technique enables to control the injection of cells into the subretinal space, reduces the risk of tissue damage and exit cells in the vitreous space. The suggested methodology allows the fixing of the cellular material in the local place of the injection and enables to predict cells`s movement.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.