соискатель,
Волоколамское шоссе, 91, Москва, 125310
applicant,
Volokolamskoe highway, 91, Moscow, 125371
доктор медицинских наук, Волоколамское шоссе, 91, Москва, 125310;
профессор, консультант, ул. Гамалеи, 15, Москва, 123098
МD, Professor, Volokolamskoe highway, 91, Moscow, 125371;
consultant, Gamalei str., 15, Moscow, 123098
доцент кафедры офтальмологии,
ул. Гамалеи, 15, Москва, 123098
Associate Professor,
Gamalei str., 15, Moscow, 123098
заведующий отделом иммунологии и межклеточных взаимодействий,
Менделеевская линия, 3, Санкт-Петербург, 199034
head of the Department of immunology and intercellular interactions,
Mendeleevskaya Line, 3, St. Petersburg, 199034
Цель работы: изучить информативность и целесообразность жидкостной биопсии при увеальной меланоме (УМ).
Материалы и методы. Выполняли жидкостную биопсию (синоним: биопсия стекловидной жидкости, СТЖ) энуклеированных глаз с УМ. Пробы СТЖ использовали для количественной оценки концентрации про-(IL-8, angiogenin, TNF-α, VEGF, bFGF) и антиангиогенных (IFN-α, TGF-β, IFN-γ) факторов роста методом мультиплексной проточной цитометрии, сравнивали с показателями пациентов с сенильной катарактой.
Результаты. Жидкостная биопсия предоставила ценную и достоверную информацию о спектре цитокинов и их количественных показателях в СТЖ глаз с УМ. По сравнению с сенильной катарактой в СТЖ глаз с УМ имело место достоверное повышение частоты обнаружения уровня проангиогенных цитокинов TNF-α (80,0 % против 47,5 %, р < 0,05; Мср ± m: 4,3 ± 1,1 пг/мл против 1,4 ± 0,3 пг/мл, р < 0,05), ИЛ-8 (100 % против 75 %, р < 0,01; 323,2 ± 227,9 пг/мл против 8,5 ± 1,5 пг/мл, р < 0,001), ангиогенина (11704,9 ± 1767,7 пг/мл против 2820,15 ± 1404,90 пг/мл, р < 0,01), VEGF (100,0 % против 68,2 %; р < 0,05; 471,49 ± 154,60 пг/мл против 18,4 ± 3,2 пг/мл, р < 0,05) и bFGF (60,0 % против 26,7 %, р < 0,05; Мср: 44,6 ± 16,2 против 2,7 ± 1,0, р < 0,001). В обеих группах больных не выявляли антиангиогенный фактор TGF-β, но концентрация ИФН-γ была обнаружена в пяти из девяти проб на уровне 14,9 ± 12,2 пг/мл, а уровни ИФН-α при УМ были в 4 раза выше: 17,6 ± 3,9 пг/мл против 4,4 ± 0,4 пг/мл (р < 0,05).
Заключение. Жидкостная биопсия глаз с УМ при использовании мультиплексной проточной цитометрии может стать ценным и высокоинформативным инструментом для изучения фенотипов УМ, при разработке и выборе молекулярных мишеней антиангиогенной, иммунной или иной таргетной терапии. Повышенные уровни проангиогенных факторов роста (IL-8, aнгиогенина, TNF-α, VEGF и bFGF), выявленные в СТЖ глаз с УМ, свидетельствуют о присутствии одновременно трех механизмов стимуляции ангиогенеза, два из которых не зависят от VEGF, действуют самостоятельно и независимо и могут проявлять синергизм. Недостаточно высокие уровни интерферонов (ИФН-γ и ИФН-α) на фоне отсутствия TGF-β в стекловидной жидкости позволяют думать о том, что подавлен контроль регуляции природного ангиостатического звена ангиогенеза на глазах с УМ. Высокие уровни цитокинов с плюрипотентными (проангиогенными и провоспалительными) свойствами свидетельствуют о том, что при опухолях хориоидеи воспаление может играть роль промотора ангиогенеза.
Purpose: to study the informativeness and appropriateness of liquid biopsy in uveal melanoma (UM).
Material and methods. Performed a liquid biopsy (synonym: vitreous fluid biopsy, CST) of enucleated eyes with UM. CST samples were used to quantify the concentration of pro-(IL-8, angiogenin, TNF-α, VEGF, bFGF) and antiangiogenic (IFN-α, TGF-β, IFN-γ) growth factors by multiplex flow cytometry. Compared with the indicators of patients with senile cataracts.
Results. Liquid biopsy provided valuable and reliable information about the spectrum of cytokines and their quantitative indicators in the CTZ of the eyes with UM. Compared with senile cataracts in the vitreous fluid of the eyes with UM, there was a significant increase in the frequency of detection and level of proangiogenic cytokines TNF-α (80.0 % vs. 47.5 %, p < 0.05; Msr ± m: 4.3 ± 1.1 pg/ml against 1.4 ± 0.3 pg/ml, p < 0.05), IL-8 (100 % vs. 75 %, p < 0.01; 323.2 ± 227.9 pg/ml versus 8.5 ± 1.5 pg/ml, r < 0.001), angiogenin (11704.9 ± 1767.7 pg/ml versus 2820.15 ± 1404.90 pg/ml, r < 0.01), VEGF (100.0 % vs. 68.2 %; p < 0.05; 471.49 ± 154.60 pg/ml vs. 18.4 ± 3.2 pg/ml, p < 0.05; 471.49 ± 154.60 pg/ml vs. 18.4 ± 3.2 pg/ml, p < 0.05) and bFGF (60.0 % vs. 26.7 %, p < 0.05; Msr: 44.6 ± 16.2 vs. 2.7 ± 1.0, p < 0.001). In both groups of patients, the antiangiogenic factor TGF-β was not detected, but the concentration of IFN-γ was found in five of the eight samples at the level of 14.9 ± 12.2 pg/ml, and the levels of IFN were 4 times higher: 17.6 ± 3.9 pg/ml against 4.4 ± 0.4 pg/ml (p < 0.05).
Conclusions. Liquid eye biopsy with UM using multiplex flow cytometry can be a valuable and highly informative tool for studying UM phenotypes, in the development and selection of molecular targets for antiangiogenic or other targeted therapies. Elevated levels of proangiogenic growth factors (IL-8, angiogenin, TNF-α, VEGF and bFGF) in vitreous fluid in UM indicate the presence simultaneously of three mechanisms for stimulating angiogenesis, two of which are independent of VEGF, act independently, and may show synergism. Insufficiently high levels of interferons (IFN-γ and IFN-α) against the background of the absence of TGF-β in the vitreous fluid allow us to think that the secretion and control of the regulation of the natural angiostatic link of angiogenesis in the eyes with choroidal melanoma is suppressed. High levels of cytokines with pluripotent (proangiogenic and pro-inflammatory) properties indicate that in choroidal tumors, inflammation may play the role of a promoter of angiogenesis.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.