ophthalmologyОфтальмологияOphthalmology in Russia1816-50952500-0845Ophthalmology10.18008/1816-5095-2017-3-251-259ophthalmology-398Research ArticleОФТАЛЬМОФАРМАКОЛОГИЯPHARMACOLOGYВЛИЯНИЕ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ГЛАЗНЫХ КАПЕЛЬ НА КЛЕТКИ ЭПИТЕЛИЯ РОГОВИЦЫ И КОНЪЮНКТИВЫ ЧЕЛОВЕКА В УСЛОВИЯХ IN VITROINFLUENCE OF NON-STEROIDAL ANTI-INFLAMMATORY EYE DROPS ON THE EPITHELIUM CELLS OF THE CORNEA AND CONJUNCTIVA IN VITROАлександроваО. И.AleksandrovaO. I.

младший научный сотрудник, отдел клеточных культур, лаборатория биологии клетки в культуре, группа клеточной биотехнологии; Тихорецкий пр. 4, Санкт-Петербург, 194064, Российская Федерация

Tikhoretsky ave. 4, St-Petersburg, 194064, Russia

ОколовИ. Н.OkolovI. N.

к.м.н., заведующий клинико-бактериологической лабораторией; ул. Я.Гашека, 21, Санкт-Петербург, 192283, Российская Федерация

21Y. Gasheka st., Saint-Petersburg, 192283, Russia

oko99@mail.ruХорольскаяЮ. И.KhorolskayaYu. I.

лаборант-исследователь, отдел клеточных культур, лаборатория биологии клетки в культуре, группа клеточной биотехнологии; Тихорецкий пр. 4, Санкт-Петербург, 194064, Российская Федерация

Tikhoretsky ave. 4, St-Petersburg, 194064, Russia

ПановаИ. Е.PanovаI. E.

доктор медицинских наук, профессор, зам. директора по научной работе; ул. Я.Гашека, 21, Санкт-Петербург, 192283, Российская Федерация

21Y. Gasheka st., Saint-Petersburg, 192283, Russia

БлиноваМ. И.BlinovaM. I.

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник, отдел клеточных культур, лаборатория биологии клетки в культуре, группа клеточной биотехнологии; Тихорецкий пр. 4, Санкт-Петербург, 194064, Российская Федерация

Tikhoretsky ave. 4, St-Petersburg, 194064, Russia

ФГБУН институт цитологии РАН, Санкт-ПетербургРоссияInstitute of Cytology of the Russian Academy of Science, Saint PetersburgRussian FederationСанкт-Петербургский филиал ФГАУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова МЗ РФРоссияSv. Fyodorov Eye Microsurgery Federal State InstitutionRussian Federation201706102017143251259Copyright © Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блинова М.И., 20172017Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блинова М.И.Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Khorolskaya Y.I., Panovа I.E., Blinova M.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.ophthalmojournal.com/opht/article/view/398

Цель: Изучить влияние глазных капель из группы НПВС с различными консервантами на жизнеспособность эпителиальных клеток глаза человека в условиях in vitro. Материалы и методы. Объектом исследования явились четыре препарата: Брокси- нак®, Акьюлар ЛС®, Дикло-Ф®, Индоколлир®. В качестве тест-систем были использованы постоянные трансформированные клеточные линии конъюнктивы (Chang Conjunctiva, Clone 1-5c-4) и роговицы (HCEC) человека. Цитотоксичность капель НПВС оценивали по морфологии и функциональной активности клеток методами фазово-контрастной микроскопии (ФКМ), МТТ-теста и клеточного анализа в режиме реального времени с использованием системы xCELLigence. Результаты. С помощью МТТ-теста было установлено, что клетки линии HCEC более чувствительны к цитотоксическому действию исследуемых препаратов, чем клетки линии Chang Conjunctiva, Clone 1-5с-4. У клеток конъюнктивы метаболическая активность в присутствии препаратов Акьюлар® и Броксинак® была в три раза ниже, чем в контроле; в присутствии препаратов Индоколлир® и Дикло-Ф® — в 20 раз ниже, чем в контроле. Метаболическая активность у клеток роговицы в присутствии препаратов Акьюлар® и Броксинак® была в четыре раза ниже, чем в контроле; в присутствии же препаратов Индоколлир® и Дикло-Ф® жизнеспособных клеток не выявлено. Препараты Индоколлир® и Дикло-Ф® оказали очень высокое токсическое действие на оба типа клеток. Результаты клеточного анализа xCELLIgence для обоих типов клеток согласуются с результатами МТТ-теста и прижизненного наблюдения за клетками методом ФКМ. Заключение. На основании полученных данных цитотоксический потенциал глазных капель из группы НПВС представлен следующим образом (по уменьшению токсичности): Индоколлир® = Дикло-Ф® > Акъюлар® = Броксинак®

Objective: to evaluate the effect of NSAIDs eye drops with different preservatives on the viability of epithelial cells of human eyes in vitro. Materials and methods. The object of the study was four of the drug Broxinac®, Acular LS®, Diclo-F ®, Indocollyre®. As test-systems were used permanent cell lines of transformed conjunctival (Chang Conjunctiva, Clone 1-5c-4) and corneal (HCEC). The cytotoxicity of NSAID drops were assessed by the morphology and functional cells activity by the methods of phase contrast microscopy (PCM), MTT test and cell analysis in real time using the xCELLigence system. Results. It was found with MTT-test that cell lines HCEC are more sensitive to the cytotoxic action of the studied drugs than cell lines of Chang Conjunctiva, Clone 1-5C-4. The metabolic activity of conjunctiva cells in the presence of drugs, Acular LS® and Broxinac® was three times lower than in control; in the presence of drugs Indocollyre® and Diclo-F® — 20 times lower vs. the control. The metabolic activity of the cornea cells e in the presence of drugs, Acular LS® and Broxinac® was four times lower than in control; in the presence of drugs Indocollyre® and Diclo-F® viable cells were not identified. Drugs Indocollyre® and Diclo-F® has had a very high toxic effect on both cell types. The results of cell analysis xCELLIgence for both types of cells are consistent with the results of MTT test and in vivo observation of cells. Conclusion. Based on these data, there is the following gradation of NSAID eye drop’s cytotoxic potential: (reduce toxicity): Indocollyre® = Diclo-F® > Acular LS® = Broxinac®.

клеточные культурыxCELLigenceконъюнктиваконсервантыНПВСроговицацитотоксичностьэпителий глазной поверхностиCell culturesxCELLigenceconjunctivapreservativesNSAIDcorneacytotoxicityocular surface epitheliumРабота выполнена в рамках проекта РНФ №14-5000068ReferencesChan C., Lam D. The comparison of efficacies of topical corticosteroids and nonsteroidal anti-inflammatory drops on dry eye patients: a clinical and immunocytochemical study. Am J Ophthalmol. 2004;137:1157-1158. DOI: 10.1016/j.ajo.2004.01.038Chan C., Lam D. The comparison of efficacies of topical corticosteroids and nonsteroidal anti-inflammatory drops on dry eye patients: a clinical and immunocytochemical study. Am J Ophthalmol. 2004;137:1157-1158. DOI: 10.1016/j.ajo.2004.01.038Lee J., Jung W., Choi Y., Kim Y. The effects of steroids and nonsteroidal antiinflammatory agents on proliferation of human ocular fibroblast. J Korean Ophthalmol Soc. 1999;40:1496-1502.Lee J., Jung W., Choi Y., Kim Y. The effects of steroids and nonsteroidal antiinflammatory agents on proliferation of human ocular fibroblast. J Korean Ophthalmol Soc. 1999;40:1496-1502.Yülek F., Ozdek S., Gürelik G., Hasanreisoğlu B. Effect of topical steroids on corneal epithelial healing after vitreoretinal surgery. Acta Ophthalmol Scand. 2006;84:319322. DOI: 10.1111/j.1600-0420.2005.00632.xYülek F., Ozdek S., Gürelik G., Hasanreisoğlu B. Effect of topical steroids on corneal epithelial healing after vitreoretinal surgery. Acta Ophthalmol Scand. 2006;84:319322. DOI: 10.1111/j.1600-0420.2005.00632.xNowak J. Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) in ophthalmology: pharmacological and clinical characteristics. Mil Pharm Med. 2012;5:4:33-50.Nowak J. Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) in ophthalmology: pharmacological and clinical characteristics. Mil Pharm Med. 2012;5:4:33-50.Иошин И.Э., Хачатрян Г.Т., Артамонова А.В., Молчанова Е.А. Нестероид ные противовоспалительные средства в коррекции послеоперационно го периода при рефракционной хирургии. [Ioshin I. E., Khachatryan G. T., Artamonova A. V., Molchanova E. A. Non-steroidal anti-inflammatory drugs in correction the postoperative period in refractive surgery Cataract & Refractive Surgery=Kataraktal’naja i refrakcionnaja hirurgija. 2013;13;3;24-30. (In Russ.)].Иошин И.Э., Хачатрян Г.Т., Артамонова А.В., Молчанова Е.А. Нестероид ные противовоспалительные средства в коррекции послеоперационно го периода при рефракционной хирургии. [Ioshin I. E., Khachatryan G. T., Artamonova A. V., Molchanova E. A. Non-steroidal anti-inflammatory drugs in correction the postoperative period in refractive surgery Cataract & Refractive Surgery=Kataraktal’naja i refrakcionnaja hirurgija. 2013;13;3;24-30. (In Russ.)].Shorstein N., Liu L., Waxman M., Herrinton L. Comparative effectiveness of three prophylactic strategies to prevent clinical macular edema following phacoe mulsification surgery. Ophthalmology. 2015;122:12.2450-2456. DOI: 10.1016/j. ophtha.2015.08.024Shorstein N., Liu L., Waxman M., Herrinton L. Comparative effectiveness of three prophylactic strategies to prevent clinical macular edema following phacoe mulsification surgery. Ophthalmology. 2015;122:12.2450-2456. DOI: 10.1016/j. ophtha.2015.08.024Dehar N., Gupta A., Singh G. Comparative study of the ocular efficacy and safety of diclofenac sodium (0.1%) ophthalmic solution with that of ketorolac tromethamine (0.5%) ophthalmic solution in patients with acute seasonal allergic conjunctivitis. International Journal of Applied and Basic Medical Research. 2012;2:1:25-30. DOI:10.4103/2229-516X.96799.Dehar N., Gupta A., Singh G. Comparative study of the ocular efficacy and safety of diclofenac sodium (0.1%) ophthalmic solution with that of ketorolac tromethamine (0.5%) ophthalmic solution in patients with acute seasonal allergic conjunctivitis. International Journal of Applied and Basic Medical Research. 2012;2:1:25-30. DOI:10.4103/2229-516X.96799.Razmju H., Khalilian A., Peyman A., Abtahi S., Abtahi M., Akbari M., Sadri L. Preoperative Topical Diclofenac and Ketorolac in Prevention of Pain and Discomfort Following Photorefractive Keratectomy: A Randomized Doublemasked Placebo-controlled Clinical Trial. International Journal of Preventive Medicine. 2012;3:l1:199-206.Razmju H., Khalilian A., Peyman A., Abtahi S., Abtahi M., Akbari M., Sadri L. Preoperative Topical Diclofenac and Ketorolac in Prevention of Pain and Discomfort Following Photorefractive Keratectomy: A Randomized Doublemasked Placebo-controlled Clinical Trial. International Journal of Preventive Medicine. 2012;3:l1:199-206.Ayaki M., Taguchi Y., Soda M., Yaguchi S., Iwasawa A., Koide R. Cytotoxicity of topical medications used for infection and inflammation control after cataract surgery in cultured corneal endothelial cells. Biocontrol Sci. 2010;15:3:97–102.Ayaki M., Taguchi Y., Soda M., Yaguchi S., Iwasawa A., Koide R. Cytotoxicity of topical medications used for infection and inflammation control after cataract surgery in cultured corneal endothelial cells. Biocontrol Sci. 2010;15:3:97–102.Naumann U., Durka S., Weller M. Dexamethasone-mediated protection from drug cytotoxicity: association with p21 WAF1/CIP1 protein accumulation? Oncogene. 1998;17:12:1567–1575.Naumann U., Durka S., Weller M. Dexamethasone-mediated protection from drug cytotoxicity: association with p21 WAF1/CIP1 protein accumulation? Oncogene. 1998;17:12:1567–1575.Ayaki M., Iwasawa A. Critical concentration of benzalkonium chloride in eye drop for toxicity in cultured ocular surface cell lines [abstract]. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2011;52:1955.Ayaki M., Iwasawa A. Critical concentration of benzalkonium chloride in eye drop for toxicity in cultured ocular surface cell lines [abstract]. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2011;52:1955.Pauly A., Brasnu E., Riancho L., Brignole-Baudouin F., Baudouin C. Multiple endpoint analysis of BAC-preserved and unpreserved antiallergic eye drops on a 3D-reconstituted corneal epithelial model. Mol Vis. 2010;17:745–755.Pauly A., Brasnu E., Riancho L., Brignole-Baudouin F., Baudouin C. Multiple endpoint analysis of BAC-preserved and unpreserved antiallergic eye drops on a 3D-reconstituted corneal epithelial model. Mol Vis. 2010;17:745–755.Domagk G. Eine neue Klasse von Desinfectionsmitteln. Deutsche Medizin Wissenschafter. 1935;61:829–832.Domagk G. Eine neue Klasse von Desinfectionsmitteln. Deutsche Medizin Wissenschafter. 1935;61:829–832.Baudouin C. Detrimental effect of preservatives in eyedrops: implications for the treatment of glaucoma. Acta Ophthalmol. 2008; 86:16-726. DOI: 10.1111/j.17553768.2008.01250.xBaudouin C. Detrimental effect of preservatives in eyedrops: implications for the treatment of glaucoma. Acta Ophthalmol. 2008; 86:16-726. DOI: 10.1111/j.17553768.2008.01250.xDe Saint Jean., Brignole F., Bringuier A., Bauchet A., Feldmann G., Baudouin C. Effects of benzalkonium chloride on growth and survival of Chang conjunctival cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1999;40:3:619–630.De Saint Jean., Brignole F., Bringuier A., Bauchet A., Feldmann G., Baudouin C. Effects of benzalkonium chloride on growth and survival of Chang conjunctival cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1999;40:3:619–630.Ichijima H., Petroll W., Jester J., Cavanagh H. Confocal microscopic studies of living rabbit cornea treated with benzalkonium chloride. Cornea. 1992;11:221-225.Ichijima H., Petroll W., Jester J., Cavanagh H. Confocal microscopic studies of living rabbit cornea treated with benzalkonium chloride. Cornea. 1992;11:221-225.Pauly A., Meloni M., Brignole-Baudouin F., Warnet J.M., Baudouin C. Multiple endpoint analysis of the 3D-reconstituted corneal epithelium after treatment with benzalkonium chloride: early detection of toxic damage. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2009;50:1644-1652. DOI: 10.1167/iovs.08-2992Pauly A., Meloni M., Brignole-Baudouin F., Warnet J.M., Baudouin C. Multiple endpoint analysis of the 3D-reconstituted corneal epithelium after treatment with benzalkonium chloride: early detection of toxic damage. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2009;50:1644-1652. DOI: 10.1167/iovs.08-2992Fisher A. Allergic reactions to merthiolate (thimerosal). Cutis. 1981; 27:6:580: 582:587.Fisher A. Allergic reactions to merthiolate (thimerosal). Cutis. 1981; 27:6:580: 582:587.Sertoli A., Di Fonzo, Spallanzani P., Panconesi E. Allergic contact dermatitis from thimerosal in a soft contact lens wearer. Contact Dermatitis. 1980;6:4:292-293.Sertoli A., Di Fonzo, Spallanzani P., Panconesi E. Allergic contact dermatitis from thimerosal in a soft contact lens wearer. Contact Dermatitis. 1980;6:4:292-293.Therapeutic Class Review Ophthalmic Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs at: http://one.aao.org/CE/PracticeGuidelines/PPP_Content.aspx?cid=0f20807f-bc614f11-b570-01ae26990edbTherapeutic Class Review Ophthalmic Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs at: http://one.aao.org/CE/PracticeGuidelines/PPP_Content.aspx?cid=0f20807f-bc614f11-b570-01ae26990edbДанченко Е.О. Оценка цитотоксичности фармацевтических субстанций с ис пользованием клеточных культур. [Danchenko E.O. Evaluation of cytotoxicity of pharmaceutical substances using cell cultures. Immunopathology, allergology, infectology=Immunopatologija, Allergologija, Infektologija. 2012;2:22-31(In Russ.)]Данченко Е.О. Оценка цитотоксичности фармацевтических субстанций с ис пользованием клеточных культур. [Danchenko E.O. Evaluation of cytotoxicity of pharmaceutical substances using cell cultures. Immunopathology, allergology, infectology=Immunopatologija, Allergologija, Infektologija. 2012;2:22-31(In Russ.)]Еропкин М.Ю., Еропкина Е.М. Клеточные культуры как модельная систе ма исследования токсичности и скрининга цитопротекторных препаратов. СПб.: Морсар, 2003. [Eropkin M.Ju., Eropkina E.M. The cell cultures as a model system toxicity studies and screening of cytoprotective drugs. SPb.: Morsar AV, 2003. (In Russ.)].Еропкин М.Ю., Еропкина Е.М. Клеточные культуры как модельная систе ма исследования токсичности и скрининга цитопротекторных препаратов. СПб.: Морсар, 2003. [Eropkin M.Ju., Eropkina E.M. The cell cultures as a model system toxicity studies and screening of cytoprotective drugs. SPb.: Morsar AV, 2003. (In Russ.)].Аникина Л.В., Пухов С.А., Дубровская Е.С., Афанасьева С.В., Клочков С.Г. Сравнительное определение жизнеспособности клеток с помощью МТТ и ресазурина. 2014;12:1423-1427. [Anikina L.V., Puhov S.A., Dubrovskaja E.S., Afanas’eva S.V., Klochkov S.G. Comparative determination of cell viability using the MTT and Resazurin. Fundamental research=Fundamental’nye issledovaniya. 2014;12:1423-1427. (In Russ.).]Аникина Л.В., Пухов С.А., Дубровская Е.С., Афанасьева С.В., Клочков С.Г. Сравнительное определение жизнеспособности клеток с помощью МТТ и ресазурина. 2014;12:1423-1427. [Anikina L.V., Puhov S.A., Dubrovskaja E.S., Afanas’eva S.V., Klochkov S.G. Comparative determination of cell viability using the MTT and Resazurin. Fundamental research=Fundamental’nye issledovaniya. 2014;12:1423-1427. (In Russ.).]Александрова О.И., Околов И.Н., Тахтаев Ю.В., Хорольская Ю.И., Хинтуба Т.С., Блинова М.И. Сравнительная оценка цитотоксичности антимикроб ных глазных капель. 2015;8:1:89-97. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Tahtaev Ju.V., Horol’skaja Ju.I., Hintuba T.S.,Blinova M.I. Comparative evaluation of the cytotoxicity of antimicrobial eye drops. Ophthalmology journal=Oftal’mologicheskie vedomosti. 2015;8:1:89-97. (In Russ.)].Александрова О.И., Околов И.Н., Тахтаев Ю.В., Хорольская Ю.И., Хинтуба Т.С., Блинова М.И. Сравнительная оценка цитотоксичности антимикроб ных глазных капель. 2015;8:1:89-97. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Tahtaev Ju.V., Horol’skaja Ju.I., Hintuba T.S.,Blinova M.I. Comparative evaluation of the cytotoxicity of antimicrobial eye drops. Ophthalmology journal=Oftal’mologicheskie vedomosti. 2015;8:1:89-97. (In Russ.)].Александрова О.И., Хорольская Ю.И., Майчук Д.Ю., Блинова М.И. Иссле дование общей цитотоксичности антибиотиков аминогликозидного и флю орохинолонового ряда на клеточных культурах. 2015;5:39-48. [Aleksandrova O.I., Horol’skaja Ju.I., Majchuk D.Ju., Blinova M.I. The study of general cytotoxicity of aminoglycoside antibiotics and fluoroquinolone in cell cultures. Annals of Ophthalmology=Vestnik oftal’mologii 2015;5:39-48. (In Russ.).] DOI: 10.17116/ oftalma2015131543-53Александрова О.И., Хорольская Ю.И., Майчук Д.Ю., Блинова М.И. Иссле дование общей цитотоксичности антибиотиков аминогликозидного и флю орохинолонового ряда на клеточных культурах. 2015;5:39-48. [Aleksandrova O.I., Horol’skaja Ju.I., Majchuk D.Ju., Blinova M.I. The study of general cytotoxicity of aminoglycoside antibiotics and fluoroquinolone in cell cultures. Annals of Ophthalmology=Vestnik oftal’mologii 2015;5:39-48. (In Russ.).] DOI: 10.17116/ oftalma2015131543-53Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Блинова М.И., Чураков Т.А. Оценка влияния бензалкония хлорид на цитотоксичность глазных ка пель неттацин и тобрекс в условиях in vitro. 2016;3:163-166. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Horol’skaja Ju.I., Blinova M.I., Churakov T.K. Assessing the impact of benzalkonium chloride and cytotoxicity Nettatsin Tobrex eyedrops under conditions in vitro. [Modern technologies in ophthalmology=Sovremennye tekhnologii v oftal’mologii. 2016;3:163-166. (In Russ.).]Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Блинова М.И., Чураков Т.А. Оценка влияния бензалкония хлорид на цитотоксичность глазных ка пель неттацин и тобрекс в условиях in vitro. 2016;3:163-166. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Horol’skaja Ju.I., Blinova M.I., Churakov T.K. Assessing the impact of benzalkonium chloride and cytotoxicity Nettatsin Tobrex eyedrops under conditions in vitro. [Modern technologies in ophthalmology=Sovremennye tekhnologii v oftal’mologii. 2016;3:163-166. (In Russ.).]Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блино ва М.И. Оценка цитотоксичности слезозаместительных препаратов с ис пользованием системы in vitro. 2017;14(1):59–66. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Horol’skaja Ju.I., Panova I.E., Blinova M.I. Cytotoxicity Evaluation of Tear Substitutes Using in vitro System. Ophthalmology in Russia=Oftal’mologija. 2017;14(1):59–66. (In Russ.).] DOI: 10.18008/1816-5095-2017-1-59-66.Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блино ва М.И. Оценка цитотоксичности слезозаместительных препаратов с ис пользованием системы in vitro. 2017;14(1):59–66. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Horol’skaja Ju.I., Panova I.E., Blinova M.I. Cytotoxicity Evaluation of Tear Substitutes Using in vitro System. Ophthalmology in Russia=Oftal’mologija. 2017;14(1):59–66. (In Russ.).] DOI: 10.18008/1816-5095-2017-1-59-66.Cancer cell culture: methods and protocols / Ser. Methods in Molecular Medicine. (Ed. S.P. Langdon). Totowa, NJ: Humana Press, 2003;88:165-169.Cancer cell culture: methods and protocols / Ser. Methods in Molecular Medicine. (Ed. S.P. Langdon). Totowa, NJ: Humana Press, 2003;88:165-169.In vitro toxicity testing protocols / Ser. Methods in Molecular Biology. (Eds S.O’Hare, C.K. Atterwill). Totowa, NJ: Humana Press, 1995;43:138–149.In vitro toxicity testing protocols / Ser. Methods in Molecular Biology. (Eds S.O’Hare, C.K. Atterwill). Totowa, NJ: Humana Press, 1995;43:138–149.Urcan E., Haertel U., Styllou M., Hickel R., Scherthan H., Reichl F. Real-time xCELLigence impedance analysis of the cytotoxicity of dental composite components on human gingival fibroblasts. Dent Mater. 2010;26:1:51-58. DOI: 10.1016/j.dental.2009.08.007.Urcan E., Haertel U., Styllou M., Hickel R., Scherthan H., Reichl F. Real-time xCELLigence impedance analysis of the cytotoxicity of dental composite components on human gingival fibroblasts. Dent Mater. 2010;26:1:51-58. DOI: 10.1016/j.dental.2009.08.007.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.