Экспериментальное сравнительное исследование цито- и фототоксичности различных агентов для хромовитрэктомии в условиях in vitro

Интравитреальное использование красителей в сочетании с действием источника эндоиллюминации может оказывать цитои фототоксическое влияние на структуры заднего сегмента глаза. Актуальным остается поиск контрастирующего агента, имеющего максимальный профиль безопасности, при этом интенсивно и селективно окрашивающего структуры стекловидного тела и витреоретинального интерфейса.

Цель исследования: провести исследование жизнеспособности клеток культуры фибробластов мыши линии NIH/3T3 при сравнительном воздействии традиционных агентов для хромовитрэктомии и суспензии «Витреоконтраст» изолированно и в условиях эндовитреального освещения.

Материалы и методы. В культуру фибробластов мыши линии NIH/3Т3 вносили агенты для хромовитрэктомии (MembraneBlue® Dual, Триамцинолона ацетонид (ТА), суспензию «Витреоконтраст»). Тестовый планшет подвергали облучению осветителем «Photon II», рабочее расстояние 5 мм. Контрольный планшет с внесенными препаратами облучению не подвергали. Далее клетки промывали и инкубировали, после чего оценивали морфологию и лизис клеток, а также количество пролиферирующих относительно отрицательного контроля фибробластов с помощью витального красителя PrestoBlue® Cell Viability Reagent. Отрицательным контролем служила полная ростовая среда для культивирования фибробластов мыши линии NIH/3T3. Полученные результаты цитотоксической реакции культуры фибробластов мыши линии NIH/3Т3 интерпретировали с использованием таблицы «Степень ответной реакции клеток».

Результаты. Проведенные исследования показали, что облучение источником эндовитреального освещения не влияет на цитотоксическое действие суспензии ТА и красителя MembraneBlue® Dual. Суспензия ТА как после облучения, так и без облучения оказывает умеренное цитотоксическое действие, а MembraneBlue® Dual не оказывает цитотоксического действия на культуру фибробластов мыши линии NIH/3T3. Без облучения суспензия «Витреоконтраст» не оказывает цитотоксического действия на культуру фибробластов мыши линии NIH/3T3. Облучение в течение 1 ч повышает цитотоксичность суспензии «Витреоконтраст» до уровня нерезкой цитотоксичности, допустимого ГОСТ ISO 10993-5-2011.

Заключение. Профиль безопасности агентов для хромовитрэктомии MembraneBlue® Dual и «Витреоконтраст» позволяет рекомендовать их для использования в ходе эндовитреальной хирургии. Продемонстрированная в эксперименте цито- и фототоксичность суспензии ТА может снижать функциональные исходы хирургии сетчатки. 

1. Chow D.R. Tips on improving your use of endoillumination. Retin Physician. 2011;8(4):43–46.

2. Rodrigues E.B., Meyer C.H., Mennel S., Farah M.E. Mechanisms of intravitreal toxicity of indocyanine green dye: implications for chromovitrectomy. Retina. 2007;27(7):958–970. DOI: 10.1097/01.iae.0000253051.01194.ab

3. Albini T., Abd-El-Barr M., Carvounis P.E., Iyer M.N., Lakhanpal R.R., Pennesi M.E., Chevez-Barrios P., Wu S.M., Holz E.R. Long-term Retinal Toxicity of Intravitreal Commercially Available Preserved Triamcinolone Acetonide (Kenalog) in Rabbit Eyes. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007;48:390–395. DOI: 10.1167/iovs.06-0145

4. Островский М.А. Молекулярные механизмы повреждающего действия света на структуры глаза и системы защиты от такого повреждения. Успехи биологической химии. 2005;45:173–204.

5. Algvere P.V., Marshall J., Seregard S. Age-related maculopathy and the impact of blue light hazard. Acta Ophthalmol Scand. 2006;84(1):4–15. DOI: 10.1111/j.16000420.2005.00627.x

6. Ham W.T., Ruffolo J.J., Mueller H.A., et al. The nature of retinal radiation dam age: dependence on wavelength, power level and exposure time. Vision Res. 1980;20:1105–1111.

7. Haritoglou C., Gandorfer A., Gass C.A. Indocyanine green-assisted peeling of the internal limiting membrane in macular hole surgery affects visual outcome: A clini copathologic correlation. Am. J. Ophthalmol. 2002;134:836–841.

8. Mackenzie S.E., Gandorfer A., Rohleder M. Ultrastructure and retinal imaging of epiretinal membrane: a clinicopathologic correlation of Trypan Blue stain ing in epiretinal membrane surgery. Retina. 2010;30(4):640–647. DOI: 10.1097/IAE.0b013e3181bceda9

9. Rodrigues E.B., Meyer C.H., Maia M. Historical aspects and evolution of the appli cation of vital dyes invitreoretinal surgery and chromovitrectomy. Dev. Ophthalmol. 2008;42:29–34. DOI: 10.1159/000138911

10. Balayre S., Boissonnot M., Curutchet L., Dighiero P. Role of trypan blue in epireti nal membrane surgery. J. Fr. Ophtalmol. 2005;28:290–297.

11. Joondeph B. Use of membrane blue in ILM and ERM peeling. Retinal Physician. 2009;6(7):54–56.

12. Lee K.L., Dean S., Guest S. A comparison of outcomes after indocyanine green and trypan blue assisted internal limiting membrane peeling during macular hole surgery. Br. J. Ophthalmol. 2005;89(4):420–422. DOI: 10.1136/bjo.2004.049684

13. Rodrigues E.B., Meyer C.H., Schmidt J.C., Kroll P. Trypan blue stains the epiretinal membrane but not the internal limiting membrane. Br J Ophthalmol. 2003;87(11):1431–1432.

14. Mohr A., Bruinsma M., Oellerich S. International Chromovitrectomy Collabora tion. Dyes for eyes: hydrodynamics, biocompatibility and efficacy of ‘heavy’ (dual) dyes for chromovitrectomy. Ophthalmologica. 2013;230(suppl 2):51–58. DOI: 10.1159/000353870

15. Bakri S.J., Beer P.M. The effect of intravitreal triamcinolone acetonide on intraocu lar pressure. Ophthalmic Surg. Lasers Imag. 2003;34:386–390. 16. Sutter F.K., Gillies M.C. Pseudo-endophthalmitis after intravitreal injection of tri amcinolone. Br. J. Ophthalmol. 2003;87:972–974.

16. Koto T., Inoue M., Shinoda K., Ishida S., Tsubota K. Residual crystals of triam cinolone acetonide in macular hole may prevent complete closure. Acta Ophthalmologica Scandinavica. 2008;85(8):913–914.

17. Miolo G., Ricci A., Caffieri S., Levorato L., Fasani E., Albini A. Invitro phototoxic properties of triamcinolone 16,17-acetonide and its mainphotoproducts. Photo chem Photobiol. 2003;78:425–430.