Электронно-микроскопические изменения сетчатки после хромовитрэктомии с использованием комбинированных красителей (экспериментальное исследование)

РЕЗЮМЕ Цель: изучить на экспериментальной модели электронно-микроскопические изменения сетчатки при окрашивании заднего сегмента глаза комбинированными красителями на основе Trypan blue и Brilliant blue G для оценки безопасности их применения. Методы. Исследование выполнено на кроликах породы шиншилла. В качестве окрашивающих агентов были использованы комбинированные красители на основе Trypan blue и Brilliant blue G: MembraneBlue-Dual (производитель DORC, Нидерланды) и «Раствор
окрашивающий для офтальмологической хирургии» (ЗАО «Оптимедсервис», Россия). Использовали стандартную методику витрэктомии с трехпортовым доступом. После удаления стекловидного тела в витреальную полость, заполненную физиологическим раствором, вводили краситель, который после 10-секундной экспозиции вымывали. Тампонаду витреальной полости выполняли физиологическим раствором. Электронном-микроскопические исследования проводили на 5, 14 и 30-е сутки после операции.  Энуклеацию выполняли через 20 минут после вывода животного из эксперимента. Контролем служили интактные парные глаза кроликов, образцы готовили параллельно, в строго идентичных условиях. Оценивали нарушение архитектоники сетчатки и наличие внутриклеточных включений. Результаты. Выявлен стадийный характер патоморфологических изменений. На 5-е сутки отмечались умеренно выраженные проявления в виде отечности и гидропической дистрофии нейронов. На 14-е сутки установлено отсутствие негативной динамики. На 30-е сутки признаки отека и дистрофии нейронов практически исчезли, что свидетельствует о принципиальной обратимости выявленных изменений. Заключение. Исследуемые вещества для окрашивания внутриглазных структур на основе Trypan blue и Brilliant blue G не вызывали существенных гистоморфологических изменений и токсического воздействия на ретинальные клеточные структуры при интравитреальном применении. Все обнаруженные электронно-микроскопические изменения имели незначительный обратимый характер и могли быть обусловлены в большей степени операционной травмой

1. Farah M.E., Maia M., Penha F.M., Rodrigues E.B. The Use of Vital Dyes during Vitreoretinal Surgery — Chromovitrectomy. Dev. Ophthalmol. 2016;55:365–75. DOI: 10.1159/000438963

2. Haritoglou C., Schuttauf F., Gandorfer A., Thaler S. An experimental approach towards novel dyes for intraocular surgery. Dev. Ophthalmol. 2008;42:141–152.

3. Стебнев В.С., Малов В.М. Микроинвазивная хромовитрэктомия 25+ Gauge в лечении пациентов с идиопатическими макулярными отверстиями. Саратовский научно-медицинский журнал. 2013;9(1):98–100. [Stebnev V.S., Malov V.M. Micro-invasive chromovirrectomy 25+ Gauge in the treatment of patients with idiopathic macular holes. Saratov Journal of Medical Scientific Research=Saratovskii nauchno-meditsinskii zhurnal. 2013;9(1):98–100. (in Russ)]

4. Стебнев С.Д., Стебнев В.С., Малов В.М. Хромовитрэктомия симптоматической витреомакулярной адгезии, осложненной первичным полным макулярным отверстием на ранних стадиях его формирования. Вестник Оренбургского государственного университета. 2015;12(187):227–230. [Stebnev S.D., Stebnev V.S., Malov V.M. Chromovertectomy of symptomatic vitreomacic adhesion, complicated by the primary full macular opening in the early stages of its formation. Annals of Orenburg State University=Vestnik Orenburgskogo gosudarstvennogo universiteta. 2015;12(187):227–230. (in Russ)]

5. Hernandez F., Alpizar-Alvarez N., Wu L. Chromovitrectomy: an Update. J. Ophthalmic Vis. Res. 2014;9(2):251–259.

6. Saffar M., Ashish S., Javier C., Leandro C., Ajayaprakash P., Navin G., Astrid L., Baruch D., Effects of light on retinal pigment epithelial cells, neurosensory retinal cells, and Muller cells treated with Brilliant Blue G. Clinical and Experimental Ophthalmology. 2015;43:820–829. DOI: 10.1111/ceo.12568

7. Veckeneer M., Mohr A., Alharthi E., et al. Novel ‘heavy’ dyes for retinal membrane staining during macular surgery: multicenter clinical assessment. Acta. Ophthalmol. 2014;92(4): 339–344. DOI: 10.1111/aos.12208

8. Mohr A., Bruinsma M., Oellerich S., et al. International Chromovitrectomy Collaboration. Dyes for eyes: hydrodynamics, biocompatibility and efficacy of ‘heavy’ (dual) dyes for chromovitrectomy. Ophthalmologica. 2013;230(2):51–58. DOI: 10.1159/000353870

9. Timothy L. Jackson. Vitreoretinal Staining Solutions Part two of a three-part series in which surgeons share pointers on the optimal use of vital dyes in retina surgery. Retina today. 2015;37–38.

10. Macky T.A., Helmy D., Shazly N. Retinal toxicity of triamcinolone’s vehicle (benzyl alcohol): an electrophysiologic and electron microscopic study. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 2007;245(6):817–824. DOI: 10.1007/s00417-006-0459-3

11. Jin Y., Uchida S., Yanagi Y., Aihara M. and Araie M. Neurotoxic effects of trypan blue on rat retinal ganglion cells. Experimental Eye Research. 2005;81(4):395–400. DOI: 10.1016/j.exer.2005.02.010

12. Kodjikian L., Richter T., Halberstadt M., et al. Toxic effects of indocyanine green, infracyanine green, and trypan blue on the human retinal pigmented epithelium. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 2005;243(9):917–925. DOI: 10.1007/s00417-004-1121-6

13. Narayanan R., Kenney M.C., Kamjoo S., Trinh T.H., Seigel G.M., Resende G.P., Kuppermann B.D. Trypan blue: effect on retinal pigment epithelial and neurosensory retinal cells. Invest Ophthalmol Vis. Sci. 2005;46:304–309. DOI: 10.1167/iovs.04-0703

14. Enaida H., Hisatomi T., Goto Y., et al. Preclinical investigation of internal limiting membrane staining and peeling using intravitreal brilliant blue G. Retina. 2006;26:623–30. DOI: 10.1097/01.iae.0000236470.71443.7c.

15. Pelayes D. E., Kuhn F., Folgar A. M., et al. Staining of the internal limiting membrane with the use of heavy brilliant blue G. Ophthalmic Research. 2012;48(1):21–25. DOI: 10.1159/000339845

16. Shimada H., Nakashizuka H., Hattori T., Mori R., Mizutani Y., and Yuzawa M. Double staining with brilliant blue G and double peeling for epiretinal membranes. Ophthalmology. 2009;116(7):1370–1376. DOI: 10.1016/j.ophtha.2009.01.024

17. Cervera E., Dґ?az-Llopis M., Salom D., Udaondo P., and Amselem L. Internal limiting membrane staining using intravitreal brilliant blue G: good help for vitreoretinal surgeon in training. Archivos de la Sociedad Espanola de Oftalmologia. 2007;82(2):7 1–72.

18. Remy M., Thaler S., Schumann R.G., et al. An in vivo evaluation of Brilliant Blue G in animals and humans. British Journal of Ophthalmology. 2008;92(8):1142–1147. DOI: 10.1136/bjo.2008.138164

19. Velez G., Weingarden A.R., Tucker B.A., Lei H., Kazlauskas A., and Young M.J. Retinal pigment epithelium and muller progenitor cell interaction increase muller progenitor cell expression of PDGFR and ability to induce proliferative vitreoretinopathy in a rabbit model. Stem. Cells International. 2012;6. DOI: 10.1155.2012.106486

20. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захарижа Е.А. Лабораторные животные их разведение, содержание и использование в эксперименте. Киев.1984;56. [Zapadnjuk I.P., Zapadnjuk V.I., Zaharija E.A. Laboratory animals, their breeding, content and use in the experiment. Kiev. 1984;56. (in Russ)].

21. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy. J. of Cell Biology. 1963;17:208–212.

22. Enaida H., Hisatomi T., Hata Y., et al. Brilliant blue G selectively stains the internal limiting membrane/ brilliant blue G-assisted membrane peeling. Retina. 2006;26:631–6. DOI: 10.1097/01.iae.0000236469.71443

23. Hiebl W., Gunther B., Meinert H. Substances for staining biological tissues: use of dyes in ophthalmology. Klin. Monbl. Augenheilkd. 2005;222(4):309–11. DOI: 10.1055/s-2005–858030

24. Andreas M. Mohr, Vitreoretinal Staining Solutions Part three of a three-part series in which surgeons share pointers on the optimal use of vital dyes in retina surgery. Retina Today. 2015;85–86.

25. Farah M.E., Maia M., Rodrigues E.B. Dyes in ocular surgery: principles for use in chromovitrectomy. Am. J. Ophthalmol. 2009;148:332–340. DOI:10.1016/j. ajo.2009.04.003.

26. Haritoglou C., Gandorfer A., Schaumberger M., et al. Trypan blue in macular pucker surgery: an evaluation of histology and functional outcome. Retina. 2004;24(4):582–590.

27. Hiroshi E., Toshio H., Yasuaki H., Akifumi U., Tatsuro I. Brilliant blue G selectively stains the internal limiting membrane/brilliant blue G-assisted membrane peeling. Retina. 2006;26: 631–636. DOI: 10.1097/01.iae.0000236469.71443

28. Costa E.F., Rodrigues E.B., Penha F.M., et al. The use of vital dyes in ocular surgery. Surv. Ophthalmol. 2009;54:576–617. DOI.org/10.1016/j.survophthal.2009.04.011