Новые свойства слезозаместителя, содержащего гепарин, в условиях in vitro (потенциальный противовирусный и противовоспалительный эффект)

Цель: изучить цитотоксический, иммунологический и противовирусный эффект препарата хилопарин-комод® in vitro.

Материал и методы. Для работы использовали перевиваемые культуры нормальных клеток конъюнктивы человека Chang conjunctiva и клеток почки обезьян Vero.  Цитотоксическое действие препарата хилопарин-комод® определяли по влиянию на  жизнеспособность клеток и оптической плотности (ОП) монослоя культуры клеток Chang  conjunctiva методом иммуноферментного анализа (ИФА) с МТТ. Влияние препарата на  функциональную активность клеток конъюнктивы оценивали по продукции цитокинов на уровне их транскрипции in vitro. Противовирусное действие препарата хилопаринкомод® изучали на линии клеток Vero, инфицированных вирусом простого  герпеса тип 1 (ВПГ-1) и ВПГ тип 2 (ВПГ-2). Вирусную активность ВПГ-1 и ВПГ-2 и  противогерпетический эффект после воздействия препарата оценивали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Результаты. Значительного цитотоксического влияния на метаболизм клеток конъюнктивы  препарата хилопарин-комод® в разведениях от 1/2 до 1/2048 не выявлено (по сравнению с  контролем). Воздействие препарата в разведениях 1/40 и 1/1000 на культуру клеток конъюнктивы приводило к подавлению продукция мРНК интерферона λ-1 (ИФНλ-1) и мРНК ИФНλ-2 по сравнению с контролем. В разведении препарата 1/1000 не определялась  продукция мРНК интерлейкина-6 (ИЛ-6) при одновременном наличии мРНК ИЛ-10. В  различных разведениях препарата количество копий вирусной ДНК ВПГ-1 снижалось по  сравнению с контролем во всех случаях, наибольший противовирусный эффект достигнут в  разведении 1:2. Воздействие препарата хилопарин-комод® на культуру клеток, зараженных ВПГ-2, в разведениях 1:2 и 1:5 приводило к снижению уровня репликации вируса в 300 и  40 раз, соответственно.

Заключение. Препарат хилопарин-комод® обладает противовоспалительным эффектом, проявляющимся в подавлении синтеза мРНК острофазного провоспалительного цитокина  ИЛ-6 и стимуляции продукции мРНК противовоспалительного ИЛ-10, не оказывая при этом  цитотоксического действия на клетки конъюнктивы. Доказанный противовирусный эффект препарата позволяет рекомендовать включение хилопарин-комод® в схему терапии пациентов с вирусной офтальмопатологией.

1. Суббот А.М., Габашвили А.Н., Нестерова Т.В. Первичные культуры клеток из ткани роговицы как тест-системы для оценки действия офтальмологических препаратов и материал для изучения патогенеза заболеваний in vitro. Точка зрения. Восток — Запад. 2017;3:90–94. [Subbot A.M., Gabashvili A.N., Nesterova T.N.[Cornea primary cell culture as test systems for assessment ophthalmological drugs and material for studyof disease pathogenesis in vitro. East-Vest=Tochka zreniya. Vostok — Zapad. 2017;3:90–94. (In Russ.)]

2. Суетина И.А., Чернакова Г.М., Майчук Д.Ю., Руссу Л.И., Клещева Е.А., Муртазалиева С.М., Мезенцева М.В. Оценка влияния комбинации офтальмологических препаратов на культуру клеток конъюнктивы человека (chang conjunctiva). Офтальмология. 2017;14(4):368–374. [Suetina I.A., Chernakova G.M., Maychuk D.Y., Mezentseva M.V., Russu L.I., Kleshcheva E.A., Murtazalieva S.M. Evaluation of the effect of the ophthalmic remedies combination on the viability of human conjunctival cell culture chang conjunctiva]. Ophthalmology in Russia= Oftal’mologiya. 2017;14(4):368–374. (In Russ.)] DOI: 10.18008/1816-5095-2017-4-368-374

3. Антонов А.А., Макарова А.С., Рещикова В.С. Экспериментальные исследования эффективности ретиналамина. Национальный журнал глаукома. 2017;16(3):98–102. [Antonov A.A., Makarova A.S., Reshchikova V.S. Experimental studies of Retinalamin efficacy. National Journal glaucoma=Natsional’nyi zhurnal glaukoma. 2017;16(3):98–102. (In Russ.)]

4. Александрова О.И., Околов И.Н., Тахтаев Ю.В., Хорольская Ю.И., Хинтуба Т.С., Блинова М.И. Сравнительная оценка цитотоксичности антимикробных глазных капель. Офтальмологические ведомости. 2015;8(1):89–97. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Takhtaev Yu.V., Khorolskaya Ju.I., Hintuba T.S., Blinova M.I. A comparative evaluation of antimicrobial eye drops cytotoxicity. Ophthalmology journal=Oftal’mologicheskie vedomosti. 2015;8(1):89–97. (In Russ.)]

5. Тахтаев Ю.В., Хинтуба Т.С., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Александрова О.И., Блинова М.И. Количественная и качественная оценка цитотоксичности антибактериальных глазных капель фторхинолонового ряда in vitro. Вестник образования и развития науки Российской академии естественных наук. 2016;2:83–90. [Takhtaev Yu.V., Khintuba T.S., Okolov I.N., Khorolskaya Yu.I., Aleksandrova O.I., Blinova M.I. Quantitative and qualitative assessment of cytotoxicity of antibacterial eye drops of fluoroquinolones in vitro. Herald of education and science development of Russian Academy of Natural Sciences=Vestnik obrazovaniya i razvitiya nauki Rossiiskoi akademii estestvennykh nauk. 2016;2:83–90. (In Russ.)]

6. Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блинова М.И. Оценка цитотоксичности слезозаместительных препаратов с использованием системы in vitro. Офтальмология. 2017;14(1):59–66. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Khorolskaya Y.I., Panovа I.E., Blinova M.I. Cytotoxicity Evaluation of Tear Substitutes Using in vitro System. Оphthalmology in Russia=Oftal’mologiya. 2017;14(1):59–66. (In Russ.)] DOI: 10.18008/1816-5095-2017-1-59-6621

7. Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блинова М.И. Влияние нестероидных противовоспалительных глазных капель на клетки эпителия роговицы и конъюнктивы человека в условиях in vitro. Офтальмология. 2017;14(3):251– 259. [Aleksandrova O.I., Okolov I.N., Khorolskaya Y.I., Panovа I.E., Blinova M.I. Influence of non-steroidal antiinflammatory eye drops on the epithelium cells of the cornea and conjunctiva in vitro. Оphthalmology in Russia=Oftal’mologiya. 2017;14(3):251–259. (In Russ.)] DOI: 10.18008/1816-5095-2017-3-251-25922

8. Мейхи Б. Вирусология. Москва :Мир; 1988. [Mahy B.W.J. Virology. Moscow: Mir; 1988. (In Russ.)]

9. Davies H.W., Appleyard G., Cunningham P., Pereira M.S. The use of acontinuous cell line for the isolation of influenza viruses. Bull World Health Organ. 1978;56(6):991–3.

10. Chomezynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinum thyocyoanate-phenol-chloroform extraction. Analytical biochemistry. 1987;162(1):156–9. DOI: 10.1006/abio.1987.9999

11. Gelder C.M., Thomas P.S., Yates D.H., Adcock I.M., Morrison J.F., Barnes P.J. Cytokine expression in normal, atopic and asthmatic subject using the combination of sputum induction and the polymerase chain reaction. Thorax. 1995;50(10):1033–7.

12. Glantz S.A. Primer of Biostatistics. Seventh Edition. The McGraw-Hill Companies, Inc.;2012.

13. Ткаченко Н.В., Астахов С.Ю. Опыт применения «Хилопарина» в клинической практике. Офтальмологические ведомости. 2014;7(4):53–62. [Tkachenko N.V., Astakhov S.Yu. The experience of “Hyloparin” use in clinical practice. Ophthalmology journal=Oftal’mologicheskie vedomosti. 2014;7(4):53–62. (In Russ.)]

14. Jiang Z., Dong X., Yan X., Liu Y., Zhang L., Sun Y. Nanogels of dual inhibitormodified hyaluronic acid function as a potent inhibitor of amyloid β-protein aggregation and cytotoxicity. Scientific reports. 2018;8(1):3505. DOI: 10.1038/s41598-018-21933-6

15. Neuman M.G., Nanau R.M., Oruna-Sanchez L., Coto G. Hyaluronic acid and wound healing. Journal of pharmacy and pharmaceutical sciences. 2015;18(1):53–60.

16. Бокарев И.Н., Попова Л.В. Опыт применения низкомолекулярных гепаринов при лечении тромбоза глубоких вен. Трудный пациент. 2008;6(10):42–48.

17. [Bokarev I.N., Popova L.V. Experience in the use of low molecular weight heparins in the treatment of deep vein thrombosis. Difficult patient=Trudnyi patsient. 2008;6(10):42–48. (In Russ.)]

18. Базарный В.В., Михайлова Н.П., Кочурова И.В., Исайкин А.И. Оценка влияния гиалуроновой кислоты на состояние гуморального иммунитета. Вестник Уральской медицинской академической науки. 2012;2(39):18. [Bazarny V.V., Mikhailova N.P., Kochurova I.V., Isaikin A.I. Asessment of hyaluronic acid effect on humoral immunity. Journal of Ural Medical Academic Science=Vestnik Ural’skoi meditsinskoi akademicheskoi nauki. 2012;2(39):18. (In Russ.)]

19. Кетлинский С.А. Симбирцев А.С. Цитокины. Санкт-Петербург: Фолиант, 2008. [Ketlinskii S.A. Simbirtsev A.S. Сytokines. Sankt-Peterburg: Foliant, 2008. (In Russ.)]

20. Nagataki S., Sugaya M. Methylcellulose and ointment vehicles: their effects on ocular pharmacokinetics. Nippon Ganka Gakkai Zasshi. 1978;82(2):127–34.

21. Chrai S.S., Patton T.F., Mehta A., Robinson J.R. Lacrimal and instilled fluid dynamics in rabbit eyes. Journal of pharmaceutical sciences. 1973;62(7):1112–21.

22. dynamics in rabbit eyes. Journal of pharmaceutical sciences. 1973;62(7):1112–21.